BHK-21細(xì)胞的培養(yǎng)需要特定的條件以確保其健康生長：

培養(yǎng)基：通常使用含有10%胎牛血清（FBS）DMEM或RPMI-1640培養(yǎng)基。

溫度與氣體環(huán)境：維持在37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中。

傳代方法：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí)，需進(jìn)行傳代。具體步驟包括棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，隨后加入消化液（如0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于37℃消化1-2分鐘，直至細(xì)胞大部分變圓并脫落，最后加入含10%血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使其脫落，離心后重懸并分配至新的培養(yǎng)瓶中。

在成功傳代后，BHK-21細(xì)胞的生長狀態(tài)需密切觀察。通常，細(xì)胞在傳代后24小時(shí)內(nèi)會重新貼壁，并在48-72小時(shí)內(nèi)進(jìn)入對數(shù)生長期。若細(xì)胞貼壁不良或生長緩慢，可能需檢查培養(yǎng)基成分是否失效，或培養(yǎng)箱的CO2濃度及濕度是否穩(wěn)定。

對于長期培養(yǎng)的BHK-21細(xì)胞，建議定期檢測支原體污染，并避免頻繁更換培養(yǎng)基批次，以減少細(xì)胞適應(yīng)性的波動。此外，凍存細(xì)胞時(shí)推薦使用含10% DMSO的凍存液，以緩慢降溫（如程序凍存盒）的方式保存于液氮中，確保細(xì)胞復(fù)蘇后的存活率。

在實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中，BHK-21細(xì)胞常用于病毒增殖、重組蛋白表達(dá)等研究。為提高外源基因的轉(zhuǎn)染效率，可采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或電穿孔法，但需優(yōu)化條件以避免細(xì)胞毒性。若用于病毒包裝，需注意細(xì)胞密度控制在60%-70%，以確保感染效率。