產(chǎn)品簡介

    本產(chǎn)品是大腸桿菌*0菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于  DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。*0是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10 8  ，適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途 

注意事項(xiàng)

1．感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在  -80℃下保存，不可反復(fù)凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2．轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。

3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗(yàn)使用。

 操作步驟

1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。

以下實(shí)驗(yàn)以50 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。

3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。

注意：

1）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可通過離心（4,000rpm，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

2）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞